La dieta della gambusia è onnivora e può variare a seconda della disponibilità di cibo. Si nutre principalmente di insetti acquatici e larve di insetti, ma anche di piccoli crostacei e alghe. È un predatore attivo e molto efficiente, in grado di catturare anche prede più grandi. In condizioni di sovraffollamento o scarsità di cibo, può praticare il cannibalismo, soprattutto a carico di uova e avannotti.
La riproduzione inizia in primavera e si protrae fino alla fine dell’estate/inizio autunno, con un picco nelle stagioni più calde. In habitat dove la temperatura è particolarmente elevata, questa può potenzialmente continuare durante tutto l'anno. La fecondazione è interna, le femmine sono ovovivipare, ovvero le uova si sviluppano all'interno del corpo materno fino alla schiusa, dando vita a piccoli avannotti già formati e completamente indipendenti. La gestazione dura circa 3-4 settimane in funzione della temperatura, della stagione e della località, in genere vengono partoriti dai 20 ai 50 avannotti circa (in alcuni casi anche più di 100). Le femmine possono produrre diverse generazioni in una sola stagione riproduttiva.
Le gambusie sono pesci gregari, tendono a formare gruppi, soprattutto in presenza di potenziali pericoli. Generalmente sono pesci molto aggressivi, sia nei confronti di altre specie che nei confronti dei loro simili.
Gli habitat preferenziali sono caratterizzati da acque calde, dolci o salmastre (con salinità moderata), stagnanti, o a lento scorrimento, con fondo fangoso, ricche di vegetazione e, possibilmente, dove non sono presenti altre specie ittiche come stagni, laghetti, paludi, canali di bonifica, zone umide e ambienti marginali dei fiumi posti nelle zone di bassa pianura. Grazie alla loro straordinaria adattabilità questi pesci possono sopravvivere in acque con un ampio range di temperatura, salinità e ossigenazione. Sono, inoltre, relativamente resistenti a malattie e parassiti, e hanno un accrescimento molto rapido.
